| Головна » Статті » Лікар відповідає |
Аналіз ПЛР й як його скласти
 ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) - це метод аналізу коротких послідовностей ДНК (або РНК) навіть в зразках, що містять тільки незначна кількість ДНК або РНК. ПЛР використовується для ампліфікації відібраних ділянок ДНК або РНК. У минулому ампліфікація ДНК передбачала клонування вакансій сегментів в переносників для виявлення бактерій і займала тижня. Але зараз за допомогою ПЛР, яка відбувається в пробірках, ампліфікація займає всього кілька годин. ПЛР високоефективна, тому можна зробити безмірну кількість ДНК. Більш того, ПЛР використовує ті ж молекули, які використовує природа для копіювання ДНК:Два праймера, короткі одноцепочные послідовності ДНК, які синтезуються для позначення початку і кінця копіюється ланцюжка ДНК Ензим, званий полімеразою, який рухається вздовж послідовності ДНК, читаючи її код і створюючи копію Складові ДНК, які необхідні полимеразе для створення копії Як проводиться аналіз ПЛР? Аналіз ПЛР включає три основних кроки. Ці три кроки повторюються по 30-40 циклів. Цикли виробляються в автоматизованому блоці для циклів, пристрої, яке швидко нагріває і охолоджує пробірки, що містять реакційну суміш. Кожен крок, денатурація (зміна структури), ренатурация і розширення, відбуваються при різній температурі: Денатурація: при температурі 94°C двухцепочная ДНК розпадається, розділяючись на дві частини одноцепочной ДНК. Ренатурация: при середній температурі, приблизно 54°C праймери об'єднуються в пари разом з одноцепочным «зразком» (ДНК для копіювання). Полімераза приєднується до двухцепочной ДНК (зразок і приєднаний праймер) і починає копіювати зразок. Розширення: при температурі 72 °C полімераза починає діяти, і складові ДНК з'єднуються з праймером, створюючи двухцепочную молекулу ДНК. Під час одного циклу одна ділянка двухцепочного зразка ДНК амплифицируется в два окремі ділянки двухцепочной ДНК. Потім ці дві ділянки можуть брати участь у ампліфікації в наступному циклі. Цикли повторюються, і тому створюється все більше копій, і кількість копій зразка збільшується експоненціально. Для чого потрібно здати аналіз ПЛР? Для того щоб здати ПЛР, оригінальна ДНК, яку потрібно скопіювати, не повинна бути чистою або у великій кількості. Вона може бути чистою, але вона також може становити незначну кількість суміші. Тому аналіз ПЛР поширений і використовується для багатьох цілей: для діагностики спадкових захворювань, геномної дактилоскопії, для виявлення бактерій і вірусів, вивчення еволюції людства, клонування ДНК з єгипетських мумій, встановлення батьківства або біологічних відносин і т.д. Відповідно аналіз ПЛР став важливим інструментом біологів, криміналістичних лабораторій і багатьох інших лабораторій, в яких вивчається генетичний матеріал. Як була відкрита ПЛР? ПЛР була відкрита Кері Мулліс. У 1983 році, коли Мулліс винайшов ПЛР, він працював в Каліфорнії на одну з передових біотехнологічних компаній. Там він створював короткі ланцюжки ДНК для інших вчених. Мулліс написав, що відкрив ПЛР під час поїздки по автомагістралі на своєму мотоциклі. Він подумки тестував новий спосіб аналізу змін (мутацій) ДНК, коли він зрозумів, що насправді він винайшов новий метод ампліфікації ДНК. Мулліс сказав, що до завершення поїздки на мотоциклі, він вже насолоджувався перспективою Нобелівської премії. У 1993 році він розділив Нобелівську премію в галузі хімії з Майклом Смітом. В журналі Scientific American Мулліс писав: «Починаючи з однієї молекули ДНК, ПЛР може створити 100 мільярдів таких же молекул менше, ніж за добу. Реакція легка у виконанні. Вона вимагає не більше, ніж пробірки, кілька простих реагентів і джерело тепла». Що таке ПЛР-РВ? ПЛР-РВ (полімеразна ланцюгова реакція зі зворотною транскрипцією) - це високочутливий метод виявлення і підрахунку иРНК (інформаційна РНК). Метод складається з двох частин: Синтезу кДНК (компліментарна ДНК) з РНК за допомогою зворотної транскрипції специфічної Ампліфікації кДНК з поомщью полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) | |
| Категория: Лікар відповідає
|
|
| Всього коментарів: 0 | |